Сравнение методов выявления биопленочного синдрома при бактериальном вагинозе
Шалепо К.В., Спасибова Е.В., Крысанова А.А., Хуснутдинова Т.А., Будиловская О.В., Сторожева К.В., Тапильская Н.И., Савичева А.М., Коган И.Ю.
При бактериальном вагинозе Gardnerella vaginalis и Fannyhessea vaginae образуют высокоструктурированные плотные биопленочные консорциумы. Ключевые клетки являются маркерами биопленочной организации бактериальных сообществ.
Цель: Сравнить микробиологические методы выявления биопленочного синдрома при бактериальном вагинозе.
Материалы и методы: Обследованы 28 женщин с жалобами на вагинальные выделения. Клиническим материалом служило отделяемое влагалища. Использовали метод микроскопии препаратов с окраской по Граму и метиленовым синим, а также метод флуоресцентной гибридизации in situ (FISH или РиГинаМ). Для молекулярного исследования использовали тест «Фемофлор».
Результаты: Диагноз бактериального вагиноза при исследовании по Нудженту установлен у 89,3% (25/28) женщин. Как при микроскопической оценке микробиоценоза влагалища с использованием анилиновых красителей, так и при оценке методом РиГинаМ получены одинаковые результаты (отношение Л:Э менее 4:1, обнаружены ключевые клетки). Лишь в трех случаях всеми методами ключевые клетки не были обнаружены. У 25 пациенток с диагностированным бактериальным вагинозом тестом «Фемофлор» во всех клинических материалах были обнаружены G. vaginalis со средним логарифмом 7,55, в 22 случаях были обнаружены F. vaginae. В трех случаях физиологического микробиоценоза влагалища общая бактериальная масса была в основном представлена лактобациллами. У этих женщин обнаружены G. vaginalis, но общая бактериальная масса их была низкой (3,6; 4,1 и
6,8 lg), F. vaginae обнаружена лишь в одном случае (2,1 lg).
Заключение: Ключевые клетки как маркер биопленочного бактериального вагиноза выявляются как при окраске препаратов по Граму, метиленовым синим, так и методом РиГинаМ. Микроскопический метод с окраской анилиновыми красителями не дифференцирует виды бактерий, входящих в состав ключевой клетки; для метода РиГинаМ необходимы специфические зонды, позволяющие определить вид микроорганизма. Метод мультиплексной ПЦР в режиме реального времени может быть использован для диагностики бактериального вагиноза в сочетании с методами микроскопии.
Вклад авторов: Шалепо К.В. – методология, дизайн и координация исследования, написание и редактирование рукописи; Спасибова Е.В. – методология, дизайн и координация исследования; Сторожева К.В. – проведение исследования, участие в подготовке рукописи и редактирование рукописи; Хуснутдинова Т.А., Будиловская О.В., Крысанова А.А. – участие в подготовке рукописи и редактирование рукописи; Тапильская Н.И., Савичева А.М. – концепция и координация исследования, редактирование рукописи, утверждение окончательного варианта статьи; Коган И.Ю. – концепция исследования. Все авторы внесли существенный вклад в проведение поисково-аналитической работы и подготовку статьи, прочли и одобрили финальную версию до публикации.
Конфликт интересов: Авторы заявляют об отсутствии конфликтов интересов.
Финансирование: Исследование выполнено в рамках научной темы ФНИ «Универсальные и специфические механизмы реализации и нарушений репродуктивной функции в семье», рег. №1021062812133-0-3.2.2.
Одобрение этического комитета: Исследование одобрено локальным этическим комитетом
«ФГБНУ НИИ АГиР им. Д.О. Отта», протокол №141 от 04.03.2025 г.
Согласие пациентов на публикацию: Пациентки подписали информированное согласие на публикацию своих данных и изображений.
Обмен исследовательскими данными: Данные, подтверждающие выводы этого исследования, доступны по запросу
у автора, ответственного за переписку, после одобрения ведущим исследователем.
Для цитирования: Шалепо К.В., Спасибова Е.В., Крысанова А.А., Хуснутдинова Т.А., Будиловская О.В., Сторожева К.В., Тапильская Н.И., Савичева А.М., Коган И.Ю.
Сравнение методов выявления биопленочного синдрома при бактериальном вагинозе.
Акушерство и гинекология. 2025; 7: 121-129
https://dx.doi.org/10.18565/aig.2025.117
Ключевые слова
бактериальный вагиноз
биопленочный синдром
биопленки
ключевые клетки
микроскопия
метод рибосомальной гибридизации на месте (РиГинаМ)
Список литературы
- Peebles K., Velloza J., Balkus J.E., McClelland R.S., Barnabas R.V. High global burden and costs of bacterial vaginosis: a systematic review and meta-analysis. Sex. Transm. Dis. 2019; 46(5): 304-11. https://dx.doi.org/10.1097/OLQ.0000000000000972
- Muzny C.A., Balkus J., Mitchell C., Sobel J.D., Workowski K., Marrazzo J. et al. Diagnosis and management of bacterial vaginosis: summary of evidence reviewed for the 2021 Centers for Disease Control and Prevention Sexually Transmitted Infections Treatment Guidelines. Clin. Infect. Dis. 2022;74(Suppl. 2): S144-51. https://dx.doi.org/10.1093/cid/ciac021
- Yudin M.H., Money D.M. No. 211 – Screening and management of bacterial vaginosis in pregnancy. J. Obstet. Gynaecol. Can. 2017; 39(8): e184-91. https://dx.doi.org/10.1016/j.jogc.2017.04.018
- Workowski K.A., Bolan G.A.; Centers for Disease Control and Prevention. Sexually transmitted diseases treatment guidelines, 2015. MMWR Recomm. Rep. 2015; 64(RR-03): 1-137.
- Ison C.A., Hay P.E. Validation of a simplified grading of Gram stained vaginal smears for use in genitourinary medicine clinics. Sex. Transm. Infect. 2002; 78(6): 413-5. https://dx.doi.org/10.1136/sti.78.6.413
- Coleman J.S., Gaydos C.A. Molecular diagnosis of bacterial vaginosis: an update. J. Clin. Microbiol. 2018; 56(9): e00342-18. https://dx.doi.org/10.1128/JCM.00342-18
- Swidsinski A., Mendling W., Loening-Baucke V., Ladhoff A., Swidsinski S., Hale L.P. et al. Adherent biofilms in bacterial vaginosis. Obstet. Gynecol. 2005; 106(5 Pt 1): 1013-23. https://dx.doi.org/10.1097/01.aog.0000183594.45524.d2
- Hardy L., Jespers V., Dahchour N., Mwambarangwe L., Musengamana V., Vaneechoutte M. et al. Unravelling the bacterial vaginosis-associated biofilm: a multiplex Gardnerella vaginalis and Atopobium vaginae fluorescence in situ hybridization assay using peptide nucleic acid probes. PLOS One. 2015; 10(8): e0136658. https://dx.doi.org/10.1371/journal.pone.0136658
- Abou Chacra L., Fenollar F., Diop K. Bacterial vaginosis: what do we currently know? Front. Cell. Infect. Microbiol. 2022; 11: 672429. https://dx.doi.org/10.3389/fcimb.2021.672429
- Gardner H.L., Dukes C.D. Haemophilus vaginalis vaginitis: a newly defined specific infection previously classified non-specific vaginitis. Am. J. Obstet. Gynecol. 1955; 69(5): 962-76. https://dx.doi.org/10.1016/0002-9378(55)90095-8
- Vaneechoutte M., Guschin A., Van Simaey L., Gansemans Y., Van Nieuwerburgh F., Cools P. Emended description Gardnerella vaginalis and description Gardnerella leopoldii sp. nov., Gardnerella piotii sp. nov. and Gardnerella swidsinskii sp. nov., with delineation of 13 genomic species within the genus Gardnerella. Int. J. Syst. Evol. Microbiol. 2019; 69(3): 679-87. https://dx.doi.org/10.1099/ijsem.0.003200
- Крысанова А.А., Гущин А.Е., Савичева А.М. Значение определения генотипов Gardnerella vaginalis в диагностике рецидивирующего бактериального вагиноза. Медицинский алфавит. 2021; 30: 48-52.
- Swidsinski A., Doerffel Y., Loening-Baucke V., Swidsinski S., Verstraelen H., Vaneechoutte M. et al. Gardnerella biofilm involves females and males and is transmitted sexually. Gynecol. Obstet. Invest. 2010; 70(4): 256-63. https://dx.doi.org/10.1159/000314015
- Swidsinski A., Loening-Baucke V., Swidsinski S., Sobel J.D., Dörffel Y., Guschin A. Clue cells and pseudo clue cells in different morphotypes of bacterial vaginosis. Front. Cell. Infect. Microbiol. 2022; 12: 905739. https://dx.doi.org/10.3389/fcimb.2022.905739
- Swidsinski A., Amann R., Guschin A., Swidsinski S., Loening-Baucke V., Mendling W. et al. Polymicrobial consortia in the pathogenesis of biofilm vaginosis visualized by FISH. Historic review outlining the basic principles of the polymicrobial infection theory. Microbes Infect. 2024; 26(8): 105403. https://dx.doi.org/10.1016/j.micinf.2024.105403
- Oliveira R., Almeida C., Azevedo N.F. Detection of microorganisms by fluorescence in situ hybridization using peptide nucleic acid. Methods Mol. Biol. 2020; 2105: 217-30. https://dx.doi.org/10.1007/978-1-0716-0243-0_13
- Савичева А.М. Современные представления о лабораторной диагностике репродуктивно значимых инфекций у женщин репродуктивного возраста. Мнение эксперта. Вопросы практической кольпоскопии. Генитальные инфекции. 2022; (3): 34-9.
- Савичева А.М., Крысанова А.А., Шалепо К.В., Спасибова Е.В., Будиловская О.В., Хуснутдинова Т.А., Тапильская Н.И., Коган И.Ю., Свидзинский А.В., Свидзинская С. Применение метода флуоресцентной гибридизации in situ в диагностике бактериального вагиноза. Акушерство и гинекология. 2023; 12: 68-77.
- Randjelovic I., Moghaddam A., Freiesleben de Blasio B., Moi H. The role of polymorphonuclear leukocyte counts from urethra, cervix, and vaginal wet mount in diagnosis of nongonococcal lower genital tract infection. Infect. Dis. Obstet. Gynecol. 2018; 2018: 8236575. https://dx.doi.org/10.1155/2018/8236575
- Кира Е.Ф. Бактериальный вагиноз. М.: МИА; 2012. 470 c.
- Amsel R., Totten P.A., Spiegel C.A., Chen K.C., Eschenbach D., Holmes K.K. Nonspecific vaginitis. Diagnostic criteria and microbial and epidemiologic associations. Am. J. Med. 1983; 74(1): 14-22. https://dx.doi.org/10.1016/0002-9343(83)91112-9
- Nugent R.P., Krohn M.A., Hillier S.L. Reliability of diagnosing bacterial vaginosis is improved by a standardized method of gram stain interpretation. J. Clin. Microbiol. 1991; 29(2): 297-301. https://dx.doi.org/10.1128/jcm.29.2.297-301.1991
Поступила 30.04.2025
Принята в печать 18.06.2025
Об авторах / Для корреспонденции
Шалепо Кира Валентиновна, к.б.н., с.н.с. группы экспериментальной микробиологии, НИИ АГиР им. Д.О. Отта,199034, Россия, Санкт-Петербург, Менделеевская линия, д. 3, +7(911)247-41-51, 2474151@mail.ru, https://orcid.org/ 0000-0002-3002-3874
Спасибова Елена Владимировна, врач-бактериолог лаборатории клинической микробиологии, НИИ АГиР им. Д.О. Отта,
199034, Россия, Санкт-Петербург, Менделеевская линия, д. 3, elena.graciosae@gmail.com, https://orcid.org/0009-0002-6070-4651
Крысанова Анна Александровна, к.м.н., с.н.с. группы экспериментальной микробиологии, НИИ АГиР им. Д.О. Отта,
199034, Россия, Санкт-Петербург, Менделеевская линия, д. 3, krusanova.anna@mail.ru, https://orcid.org/0000-0003-4798-1881
Будиловская Ольга Викторовна, к.м.н., с.н.с. группы экспериментальной микробиологии, НИИ АГиР им. Д.О. Отта,
199034, Россия, Санкт-Петербург, Менделеевская линия, д. 3, o.budilovskaya@gmail.com, https://orcid.org/0000-0001-7673-6274
Хуснутдинова Татьяна Алексеевна, к.м.н., с.н.с. группы экспериментальной микробиологии, НИИ АГиР им. Д.О. Отта,
199034, Россия, Санкт-Петербург, Менделеевская линия, д. 3, husnutdinovat@yandex.ru, https://orcid.org/0000-0002-2742-2655
Сторожева Ксения Васильевна, аспирант, НИИ АГиР им. Д.О. Отта, 199034, Россия, Санкт-Петербург, Менделеевская линия, д. 3, kvstorozheva@mail.ru,
https://orcid.org/ 0009-0005-8954-0234
Тапильская Наталья Игоревна, д.м.н., профессор, в.н.с. отдела репродукции, НИИ АГиР им. Д.О. Отта, 199034, Россия, Санкт-Петербург, Менделеевская линия, д. 3, tapnatalia@mail.ru, https://orcid.org/ 0000-0001-5309-0087
Савичева Алевтина Михайловна, д.м.н., профессор, заслуженный деятель науки РФ, заведующая отделом медицинской микробиологии, НИИ АГиР им. Д.О. Отта, 199034, Россия, Санкт-Петербург, Менделеевская линия, д. 3, savitcheva@mail.ru, https://orcid.org/ 0000-0003-3870-5930
Коган Игорь Юрьевич, чл.-корр. РАН, д.м.н., профессор, директор, НИИ АГиР им. Д.О. Отта, 199034, Россия, Санкт-Петербург, Менделеевская линия, д. 3, ovr@ott.ru, https://orcid.org/0000-0002-7351-6900
Автор, ответственный за переписку: Кира Валентиновна Шалепо, 2474151@mail.ru
Также по теме
