Диагностическая значимость предактивированных нейтрофилов при преэклампсии

Харченко Д.К., Асташкин Е.И., Кан Н.Е., Тютюнник Н.В., Орехова Н.С., Борис Д.А. Тютюнник В.Л.

1 ФГБУ Национальный медицинский исследовательский центр акушерства, гинекологии и перинатологии им. академика В.И. Кулакова Минздрава России; 2 ФГАОУ ВО Первый Московский государственный медицинский университет имени И.М. Сеченова Минздрава России (Сеченовский Университет)
Цель исследования. Изучить взаимосвязь содержания предактивированных (праймированных) нейтрофилов в периферической крови беременных с преэклампсией.
Материал и методы. В исследование включены 14 женщин с преэклампсией (основная группа – I) и 15 женщин с физиологически протекающей беременностью (контрольная группа – II) и 11 небеременных женщин (для получения нормативных значений). В периферической крови определяли формил пептид (fMLP), градиенты фиколл-гипак (1,077 и 1,119 г/мл), люцигенин, среда RPMI-1640, среда Хенкса, эмбриональная сыворотка телят – Sigma-Aldrich. Выделяли нейтрофилы из крови, полученной из локтевой вены (антикоагулянт гепарин 35 МЕ/мл), на двухступенчатом градиенте фиколл-гипак. Эритроциты разрушали с помощью гипотонического лизиса. Нейтрофилов в суспензиях было не менее 96%. Живые клетки в тесте с трипановым синим составляли 94%. Готовые суспензии содержали 1×106 клеток/мл. В качестве стимулятора использовали формил-метионил-лейцил-фенилаланинин (fMLP, 2 мкМ). Образование радикалов кислорода регистрировали с помощью люминофора-люцигенина (30 мкМ) на хемилюминометре «Биотокс-7» (Россия) в имп/сек. Определяли максимальную амплитуду образования радикалов, время ее достижения, а также свето-сумму за фиксированный период времени.
Результаты. В суспензиях клеток небеременных женщин отмечалось монотонное «спонтанное» увеличение образования радикалов кислорода с очень низкой скоростью. У здоровых беременных скорость возрастает в 1,3 раза (р>0,05). Скорость «спонтанной» генерации радикалов кислорода резко возрастала у беременных с преэклампсией. В этой группе образование радикалов кислорода достигает максимальных значений и выходит на плато через 24±7 мин. По-видимому, «спонтанное» образование радикалов обусловлено стимуляцией исходно праймированных нейтрофилов в результате их адгезии на стенках кюветы. Для проверки этого предположения к суспензиям добавляли стандартный стимулятор fMLP, который выраженным образом стимулировал генерацию радикалов кислорода нейтрофилами женщин с преэклампсей. Следует отметить, что как у небеременных женщин, так и у здоровых беременных fMLP значительно слабее увеличивал уровень радикалов по сравнению с ответами нейтрофилов женщин с преэклампсией.
Заключение. Потенциирование ответа на формил пептид на фоне «спонтанной» стимуляции нейтрофилов беременных женщин с преэклампсией свидетельствует о присутствии в их периферической крови праймированных клеток. Такой суммарный ответ позволяет предположить, что механизм стимуляции нейтрофилов в результате адгезии на стенке кюветы и при действии fMLP разный, носит аддитивный характер и осуществляется с помощью разных процессов.

Ключевые слова

преэклампсия
оксидативный стресс
предактивированные нейтрофилы
прайми­рование

Список литературы

1. Савельева Г.М., Сухих Г.Т., Серов В.Н., Радзинский В.Е., ред. Акушерство. Национальное руководство. М.: ГЭОТАР-Медиа; 2015. 1080с.

2. Ходжаева З.С., Холин А.М., Вихляева Е.М. Ранняя и поздняя преэклампсия: парадигмы патобиологии и клиническая практика. Акушерство и гинекология. 2013; 10: 4-11.

3. Tsukimori K., Fukushima K., Tsushima A., Nakano H. Geteration of reactive oxygen species by neutrophils and endothelial cell injury in normal and preeclamptic pregnancies. Hypertension. 2005; 46(4): 696-700. doi: 10.1161/01.HYP.0000184197.11226.71.

4. Tsukimori K., Nakano H., Wake N. Difference in neutrophil superoxide generation during pregnancy between preeclampsia and essential hypertension. Hypertension. 2007; 49(6): 1436-41. doi: 10.1161/HYPERTENSIONAHA.106.086751.

5. Mihu D., Razvan C., Malutan A., Mihaela C. Evaluation of maternal systemic inflammatory response in preeclampsia. Taiwan. J. Obstet. Gynecol. 2015; 54(2): 160-6. doi: 10.1016/j.tjog.2014.03.006.

6. Müller-Deile J., Schiffer M. Preeclampsia from a renal point of view: Insides into disease models, biomarkers and therapy. World J. Nephrol. 2014; 3(4): 169-81. doi: 10.5527/wjn.v3.i4.169

7. Palei A.C., Spradley F.T., Warrington J.P., George E.M., Granger J.P. Pathophysiology of hypertension in preeclampsia: a lesson in integrative physiology. Acta Physiol. (Oxford). 2013; 208(3): 224-33. doi: 10.1111/apha.12106

8. Ciz M., Denev P., Kratchanova M., Vasicek O., Ambrozova G., Lojek A. Flavonoids inhibit the respiratory burst of neutrophils in mammals. Oxid. Med. Cell. Longev. 2012; 2012: ID181295. doi:10.1155/2012/181295

9. Volk A.P.D., Barber B.M., Goss K.L., Ruff J.G., Heise Ch.K., Hook J.S., Moreland J.G. Priming of neutrophils and differentiated PLB-985 cells by pathophysiological concentration of TNF-a is partially oxygen dependent. J. Innate Immun. 2011; 3(3): 298-314. doi: 10.1159/000321439.

10. Zarbock A., Ley K. Neutrophil adhesion and activation under flow. Microcirculation. 2009; 16(1): 31-42. doi: 10.1080/10739680802350104.

11. Miralda I., Uriarte S.M., McLeish K.R. Multiple phenotypic changes define neutrophil priming. Front. Cell. Infect. Microbiol. 2017; 7: 217. doi: 10.3389/fcimb.2017.00217

12. Germain A.J., Sacks G.P., Soorana S.R., Sargent I.L., Redman C.W. Systemic inflammatory priming in normal pregnancy and preeclampsia: the role of circulating syncytiotrophoblast microparticles. J. Immunol. 2007; 178(9): 5949-56. doi: 10.4049/jimmunol.178.9.5949

13. Moreland J.G., Davis A.P., Matsuda J.J., Hook J.S., Bailey G., Nauseef W.M., Lamb F.S. Endotoxin priming of neutrophils requires NADPH oxidase-generated oxidants and is regulated by the anion transporter ClC-3. J. Biol. Chem. 2007; 282(47): 33958-67. doi: 10.1074/jbc.M705289200

14. Mittal M., Siddiqui M.R., Tran K., Reddy S.P., Malik A.B. Reactive oxygen species in inflammation and tissue injury. Antioxid. Redox. Signal. 2014; 20(7): 1127-67. doi: 10.1089/ars.2012.5149

15. Rolfo A., Giuffrida D., Nuzzo A.M., Pierobon D., Cardaropoli S., PiccoliE. et al. Pro-inflammatory profile of preeclamptic placental mesenchymal stromal cells: New insights into the etiopathogenesis of preeclampsia. PLoS One. 2013; 8(3): e59403. doi: 10.1371/journal.pone.0059403

16. Husemann J., Obstfeld A., Febbraio M., Kodama T., Silverstein S.C. CD11b/CD18 mediates production of reactive oxygen species by mouse and human macrophages adherent to matrixes containing oxidized LDL. Arterioscler. Thromb. Vasc. Biol. 2001; 21(8): 1301-5.

17. Forsyth K.D., Levinsky R.J. Role of the LFA-1 adhesion glycoprotein in neutrophil adhesion to endothelium and plastic surfaces. Clin. Exp. Immunol. 1989; 75(2): 265-8.

18. Maruyama N., Tansho-Nagakawa S., Miyazaki C., Shimomura K., Ono Y., Abe S. Inhibition of neutrophil adhesion and antimicrobial activity by diluted hydrosol prepared from Rosa damascene Biol. Pharm. Bull. 2017; 40(2): 161-8. doi:10.1248/bpb.b16-00644

19. Wenceslau C.F., McCarthy C.G., Goulopoulou S., Szasz T., NeSmith E.G., Webb R.C. Mitochondrial-derived N-formyl peptides: novel links between trauma, vascular collapse and sepsis. Med Hypotheses. 2013; 81(4): 532-5. doi: 10.1016/j.mehy.2013.06.026.

Поступила 17.02.2018

Принята в печать 02.03.2018

Об авторах / Для корреспонденции

Харченко Дарья Константиновна, аспирант ФГБУ «Национальный медицинский исследовательский центр акушерства, гинекологии и перинатологии
им. академика В.И. Кулакова» Минздрава России. 117997, г. Москва ул. Академика Опарина, дом 4. Тел.: 8-915-165-87-00. E-mail: drkharchenko@mail.ru
Асташкин Евгений Иванович, д.б.н., профессор кафедры патологии ФГАОУ ВО Первый Московский государственный медицинский университет имени И.М. Сеченова» Минздрава России (Сеченовский Университет). 119991, Москва, ул. Трубецкая, д. 8, стр. 2. Тел. 8-916-062-05-30. E-mail: ast-med@mail.ru
Кан Наталья Енкыновна, д.м.н., заведующая акушерским отделением ФГБУ «Национальный медицинский исследовательский центр акушерства, гинекологии и перинатологии им. академика В.И. Кулакова» Минздрава России. 117997 г. Москва ул. Академика Опарина, дом 4. Тел. 8-926-220-86-55. E-mail: kan-med@mail.ru.
Номер Researcher ID B-2370-2015. ORCID ID 0000-0001-5087-5946
Тютюнник Наталия Викторовна, аспирант ФГБУ «Национальный медицинский исследовательский центр акушерства, гинекологии и перинатологии
им. академика В.И. Кулакова» Минздрава России. 117997, г. Москва ул. Академика Опарина, дом 4. Тел.: 8-903-144-50-05. E-mail: tysia07@bk.ru
Орехова Наталья Стефановна, к.м.н., старший научный сотрудник лаборатории экстремальных состояний НИЦ ФГАОУ ВО Первый Московский государственный медицинский университет имени И.М. Сеченова» Минздрава России (Сеченовский Университет). 119991, Москва, ул. Трубецкая, д. 8, стр. 2.
Тел.: 8-915-361-19-58. E-mail: ast-med@mail.ru
Борис Даяна Амоновна, аспирант ФГБУ «Национальный медицинский исследовательский центр акушерства, гинекологии и перинатологии им. академика В.И. Кулакова» Минздрава России. 117997, г. Москва ул. Академика Опарина, дом 4. Тел.: 8-915-081-89-97. E-mail: dayana_boris@mail.ru
Тютюнник Виктор Леонидович, д.м.н., заведующий 1-ым акушерским физиологическим отделением ФГБУ «Национальный медицинский исследовательский центр акушерства, гинекологии и перинатологии им. академика В.И. Кулакова» Минздрава России. 117997, г. Москва ул. Академика Опарина, дом 4. Тел.: 8-903-969-50-41. E-mail: tioutiounnik@mail.ru. Номер Researcher ID B-2364-2015.ORCID ID 0000-0002-5830-5099.

Для цитирования: Харченко Д.К., Асташкин Е.И., Кан Н.Е., Тютюнник Н.В., Орехова Н.С., Борис Д.А. Тютюнник В.Л. Диагностическая значимость предактивированных нейтрофилов при преэклампсии. Акушерство и гинекология. 2018; 11: 24-30.
https://dx.doi.org/10.18565/aig.2018.11.24-30

Также по теме