Несмотря на большой прогресс в изучении репродукции человека, механизмы развития родовой деятельности остаются одним из ключевых вопросов современного акушерства. В современной литературе растет количество данных, указывающих на роль иммунологических факторов воспаления в развитии и прогрессировании родов [1]. Особое место отводится цитокинам, которые играют важную роль в регуляции иммунных реакций как при нормальном, так и при осложненном течении беременности.
Известно, что началу родовой деятельности предшествует инфильтрация плаценты лейкоцитами и нарастание синтеза провоспалительных цитокинов в децидуальной и плодных оболочках, а также в шейке матки, о чем свидетельствует повышение уровня цитокиновых мРНК в биоптатах этих тканей [2, 3]. В то же время продолжает обсуждаться роль плода и плаценты как инициаторов родовой деятельности. В связи с этим актуально изучение содержания цитокинов в пуповинной крови для выявления их роли в развитии родов.
Цель исследования: изучить содержание провоспалительных и противовоспалительных цитокинов в пуповинной крови после самопроизвольных родов и родоразрешения путем кесарева сечения до начала родовой деятельности.
Материал и методы исследования
В исследование были включены 64 здоровые перво- и повторнородящие женщины, которые были родоразрешены в ФГБУ НЦАГиП им. В.И. Кулакова в период 2015–2016 гг. Критериями включения в исследование были: возраст от 18 до 40 лет, самопроизвольно наступившая одноплодная беременность, головное предлежание плода, доношенный срок беременности, спонтанные неосложненные роды через естественные родовые пути или плановое кесарево сечение (до начала родовой деятельности), информированное согласие пациентки на проведение исследования. Показаниями к оперативному родоразрешению послужили: миопия высокой степени с изменениями на глазном дне, анатомически узкий таз, рубец на матке после кесарева сечения.
Критериями исключения служили: тяжелая соматическая патология, осложненное течение беременности, родов или кесарева сечения, аномалии развития матки, пороки развития плода, подтвержденные лабораторно признаки внутриутробной инфекции новорожденного.
С целью оценки содержания цитокинов в пуповинной крови проведено исследование образцов крови из артерии и вены пуповины, взятых у 64 новорожденных, матери которых были родоразрешены в сроке беременности 38 недель 0 дней – 40 недель 6 дней через естественные родовые пути (n=33) или путем кесарева сечения (n=31).
Сразу после рождения ребенка и отделения его от пуповины ее пережимали с двух сторон и производили забор крови сначала из артерии, затем из вены пуповины при помощи 9-миллилитрового полипропиленового вакутейнера (S-Monovette, Германия). Образцы крови центрифугировали при 23°С в течение 10 мин при 3000 об./мин, после чего сыворотку замораживали и хранили при -80°С до проведения анализа.
Определение концентрации цитокинов: интерлейкина (ИЛ)-1β, ИЛ-2, ИЛ-4, ИЛ-5, ИЛ-6, ИЛ-8, ИЛ-10, ИЛ-12, ИЛ-13, ИЛ-17, фактора некроза опухоли (ФНО)-α, интерферона (ИФН)-γ в сыворотке пуповинной крови проводили мультиплексным методом с использованием стандартной 17-плексной тест-системы Bio-Plex Pro Human Cytokine 17-plex Assay (Bio-Rad, США) на проточном лазерном иммуноанализаторе Bio-Plex 200 (Bio-Rad, США) и последующей обработкой полученных результатов с использованием приложения Bio-Plex Manager 6.0 Properties (Bio-Rad, США). Исследования проводили в соответствии с инструкцией фирмы-производителя. Содержание цитокинов в сыворотке крови выражали в пикограммах в миллилитре (пг/мл). Диапазон измерений составлял 0,1–5,0 пг/мл. Статистическую обработку полученных результатов проводили с помощью статистической программы MedCalc Statistical Version 12.1. Сравнение количественных показателей в исследуемых группах проводили при помощи критерия Манна–Уитни. Для сравнения качественных показателей использовали критерий χ2. Различия между сравниваемыми величинами признавали достоверными при p<0,05 (95% уровень достоверности).
Результаты исследования
В табл. 1 приведены основные характеристики пациенток и их новорожденных в группах. Не было различий в данных соматического, гинекологического и акушерского анамнеза, паритета, течения настоящей беременности, а также срока беременности на момент родоразрешения у обследуемых женщин. Все дети родились в удовлетворительном состоянии, не было различий в массо-ростовых показателях и значениях pH крови из артерии пуповины и оценок по шкале Апгар.
Результаты оценки содержания цитокинов в сыворотке крови из артерии и вены пуповины при родах через естественные родовые пути и при плановом кесаревом сечении представлены на рисунке.
Как показали полученные результаты, по сравнению с кесаревым сечением самопроизвольные роды характеризуются более высокой концентрацией провоспалительных (ИФН-γ, ИЛ-1β, ИЛ-6, ИЛ-8, ИЛ-17) и противовоспалительных цитокинов (ИЛ-13, ИЛ-5) в артерии пуповины. Так, уровни ИЛ-6 и ИЛ-8 были в 1,8 раза выше в группе родов, чем кесарева сечения и составили, соответственно, 0,353±0,141 против 0,191±0,020 для ИЛ-6 (р<0,0001) и 0,227±0,106 против 0,126±0,011 для ИЛ-8 (р=0,0003).
В вене пуповины концентрация провоспалительных цитокинов ИЛ-6, ИЛ-8, ИЛ‑12 и противовоспалительного цитокина ИЛ-13 также были выше при самопроизвольных родах, чем при кесаревом сечении. При этом уровень ИЛ‑6 был в 1,4 раза (0,305±0,094 и 0,209±0,019, р=0,0008), а ИЛ-8 в 1,6 раза (0,215±0,080 и 0,131±0,012, р=0,0001) выше в родах, чем при кесаревом сечении.
В связи с тем, что по артерии пуповины кровь идет от плода, а по вене – от плаценты, представляет интерес оценка цитокинового профиля отдельно в каждом из этих сосудов. При сравнении концентрации цитокинов из артерии и вены пуповины при родах через естественные родовые пути выявлено, что концентрация ИЛ‑4 в вене пуповины значительно выше, чем в артерии (0,150±0,015 против 0,139±0,017, р=0,045). Различий в содержании других исследованных цитокинов не обнаружено (табл. 2).
При сравнении концентрации цитокинов из артерии и вены пуповины при родоразрешении путем операции кесарева сечения различий в содержании исследуемых цитокинов не было обнаружено (табл. 3).
Обсуждение
В данной работе проводилась сравнительная оценка содержания цитокинов в сыворотке крови из артерии и вены пуповины новорожденных, которые родились путем самопроизвольных родов или кесарева сечения до начала родовой деятельности. В результате показано, что в сравнении с родоразрешением путем кесарева сечения до начала родовой деятельности самопроизвольные роды характеризуются более высокой концентрацией как провоспалительных (ИЛ-1β, ИЛ-6, ИЛ-8, ИЛ-12, ИЛ-17, ИФН-γ), так и противовоспалительных цитокинов (ИЛ-5, ИЛ-13) в пуповинной крови. Полученные нами результаты соответствуют данным других исследований. Так, похожие результаты были получены C.J. Chan и соавт. (2013), которые обнаружили, что концентрация ИЛ-6, ИЛ-8 и ИЛ-10 в пуповинной крови после спонтанных родов была выше, чем после кесарева сечения [4]. Повышение концентрации цитокинов свидетельствует об активации иммунологических реакций плодово-плацентарного комплекса во время родов.
Нами обнаружено, что наиболее заметно в родах возрастает концентрация провоспалительных цитокинов ИЛ-6 и ИЛ-8. Это также согласуется с результатами исследований других авторов [5, 6]. Предполагается, что более высокая концентрация провоспалительных цитокинов обусловлена тем, что в родах хориоамнионит встречается в 5 раз чаще, чем при кесаревом сечении [7]. Кроме того, более высокая концентрация этих цитокинов в вене пуповины может иметь и материнское происхождение, поскольку их концентрация увеличивается в периферической крови матери с началом и прогрессированием родовой деятельности [8].
Следует заметить, что C.J. Chan и соавт. (2013) не обнаружили различий в содержании цитокинов крови между артерией и веной пуповины при родоразрешении путем кесарева сечения до начала родов, тогда как после самопроизвольных родов концентрация провоспалительных цитокинов ИЛ-6, ИЛ-8 была выше в артерии, а противовоспалительного цитокина ИЛ-10 – в вене [4].
Наше исследование также показало, что при самопроизвольных родах в вене пуповины концентрация противовоспалительного цитокина ИЛ-4 выше, чем в артерии. Учитывая продукцию ИЛ-4 лимфоидными клетками плаценты и децидуальной оболочки [9, 10], а также его способность активировать синтез простагландина E2 в этих тканях [11], логично предположить его участие в инициации и поддержании родовой деятельности. Кроме того, на возможное участие ИЛ-4 в инициации родов также указывают данные, свидетельствующие о повышенной продукции этого цитокина при иммунологических реакциях отторжения трансплантата [12, 13].
Заключение
Таким образом, полученные результаты позволяют предположить, что спонтанные роды в отличие от родоразрешения в отсутствии родовой деятельности, связаны с активацией иммунологических реакций в плодово-плацентарном комплексе.
Полученные данные соответствуют представлениям об участии воспалительных механизмов и реакции отторжения в развитии родов, а также интранатальной подготовки иммунной системы плода к его внеутробному существованию.
Для уточнения роли воспалительных механизмов в инициации родовой деятельности необходимо их изучение при преждевременных родах и переношенной беременности.
