Выбор эффективной гестагенной терапии с использованием клеточных технологий

М.А. Петросян, Н.О. Мележникова, А.П. Домнина, Т.С. Клейменова, Е.В. Базиян, Л.С. Полянских, А.В. Разыграев

1 Научно-исследовательский институт акушерства, гинекологии и репродуктологии им. Д.О. Отта, Санкт-Петербург, Менделеевская линия, 3; 2 Институт цитологии РАН, Санкт-Петербург, Тихорецкий пр., 4

Лекарственные препараты на основе женских половых стероидных гормонов занимают ведущее место в профилактике и лечении многих гинекологических заболеваний и акушерской патологии. Однако медикаментозная терапия лекарственными средствами, имеющимися в арсенале врача, не всегда дает ожидаемый эффект, что требует повторного лечения с подбором нового препарата. Персонализированный подход к назначению эффективной гормональной терапии в случаях, трудно поддающихся лечению, позволит избежать негативных последствий необоснованного лечения, сократить экономические затраты на последующую коррекцию возможных осложнений и улучшит качество жизни пациентов. Ранее проведенные нами исследования показали, что клеточные линии, полученные на основе эндометрия человека, могут быть использованы в качестве in vitro модели для изучения и поиска эффективных гестагенных препаратов [1, 2]. Разработка такой модели позволит проводить скрининговый поиск новых лигандов прогестероновых рецепторов, а также изучать молекулярно-клеточные механизмы их фармакологического действия, не сталкиваясь с видовыми различиями в случае использования модельных животных.

Целью исследования явилось изучение возможности использования клеточной модели, полученной из эндометрия человека, для персонализированного подбора препаратов гестагенного ряда.

Материалы и методы. Из биоптатов ткани эндометрия 12 пациенток, находившихся в отделении оперативной гинекологии ФГБНУ «НИИ АГиР им. Д.О.Отта», были получены 12 новых клеточных линий. Эндометриальные клеточные линии (ЭКЛ) выделяли ферментативным путем и культивировали в среде DMEM/F12, содержащей 10% FBS и 1% смеси антибиотиков – PEST (БиолоТ, Россия) (1% пенициллина и 1% стрептомицина). Иммунофенотипирование проводили с помощью проточного цитофлуориметра Beckman Coulter (США). Для кариотипирования использовали QFH метод дифференциального окрашивания. Экспрессию рецепторов прогестерона и эстрогена определяли иммуноцитохимическим методом, а также методом ПЦР. Децидуальную трансформацию ЭКЛ проводили с помощью комбинаций эстрадиола и прогестерона (Sigma-Aldrich), а также его новых аналогов, синтезированных в ФИЦ биотехнологии РАН. Уровни экспрессии пролактина и протеина-1, связывающего инсулиноподобный фактор роста (IGFBP-1), определяли методом ИФА.

Результаты исследования показали, что все полученные ЭКЛ проявляли адгезивные свойства к пластику, имели позитивную экспрессию маркеров СD9, СD13, СD31, СD44, CD73, CD90, CD105, СD146 и негативную – СD34, СD45, HLA-DR (II класса), а также демонстрировали способность трансформироваться в другие типы клеток мезодермы, такие как остеобласты и адипоциты, что указывает на мезенхимное происхождение линий. Во всех ЭКЛ была установлена позитивная экспрессия рецепторов эстрогена и прогестерона, а также нормальный конституционный кариотип. Культивирование ЭКЛ в присутствии цАМФ вызвало децидуальную трансформацию клеток, о чем свидетельствовало увеличение содержания специфических маркеров децидуализации – пролактина и протеина-1, связывающего инсулиноподобный фактор роста, а также изменение клеточной морфологии. При гормональном воздействии на ЭКЛ комбинаций эстрадиола с прогестероном и его аналогами уровни секреции маркеров децидуализации повышались, причем в случае воздействия высокоактивных аналогов прогестерона в большей степени. Установлено, что ЭКЛ проявляли разную чувствительность к гормональному воздействию, а в ряде случаев не подвергались трансформации в децидуальном направлении под действием изучаемых комбинаций гормонов.

Характеристика изученных нами клеточных линий, полученных из эндометрия доноров, позволяет отнести ЭКЛ к мультипотентным мезенхимальным стволовым клеткам человека. Тот факт, что высокоактивные гестагены вызывают клеточную децидуализацию в ЭКЛ, проявивших чувствительность к гормональному воздействию, в большей степени, чем прогестерон, согласуется с результатами исследований, полученных на модельных животных [3]. Таким образом клеточная модель на основе эндометрия человека может оказаться полезной для персонализированного подбора препаратов гестагенного ряда.

Работа выполнена при финансовой поддержке Российского фонда фундаментальных исследований (проект 18-015-00449-А).

Список литературы

  1. Культура эндометрия человека: модель изучения репродуктивной функции / Э.К. Айламазян, М.А. Петросян, Г.Х. Толибова, Т.А. Крылова, Т.С. Горячая, Л.И. Петрова, А.О. Дурнова, В.О. Полякова, И.М. Кветной. Медицинский академический журнал. 2012; 12 (1): 28–35.
  2. Поиск новой клеточной модели для изучения фармакологической активности аналогов прогестерона / М.А. Петросян, Н.О. Мележникова, А.П. Домнина, В.А. Андрюшина, Т.С. Горячая, Л.И. Петрова, О.В. Малышева, В.О. Полякова, А.В. Разыграев, Н.С. Сапронов. Цитология. 2017; 59 (10): 676–684.
  3. Корхов В.В., Лесик Е.А., Петросян М.А. Исследование гестагенной и контрацептивной активности синтетических аналогов прогестерона в эксперимент. Экспериментальная и клиническая фармакология. 2005; 68 (1): 39–41.
Продолжая использовать наш сайт, вы даете согласие на обработку файлов cookie, которые обеспечивают правильную работу сайта.