Преимущества метода проточной цитофлуориметрии в оценке функциональной активности тромбоцитов у женщин в программе ЭКО

О.С. Безнощенко, М.И. Маркелов, Е.Е. Краевая, Е.А. Калинина, Л.В. Кречетова

Федеральное государственное бюджетное учреждение «Национальный медицинский исследовательский центр акушерства, гинекологии и перинатологии им. академика В.И. Кулакова» Министерства здравоохранения РФ, Москва, Россия, 117997, ул. Академика Опарина, 4

Введение. Гемостаз играет важную роль в процессе имплантации бластоцисты, а его изменение ведет к неэффективности ЭКО [1]. Тромбоциты тесно связаны с плазменным гемостазом, их активация приводит к запуску каскада свертывания с образованием фибринового сгустка [2]. Оценка гиперактивации тромбоцитов затруднительна, так как широко применяемый оптический метод агрегации тромбоцитов ориентирован на диагностику тромбоцитопатий и контроль применения антиагрегантов [3]. Современный тест функциональной активности тромбоцитов (ФАТ) с помощью метода проточной цитофлуориметрии (ПЦ) дает полную информацию о функциональном состоянии тромбоцитов, а также их способности к активации в присутствии агонистов [4].

Цель: оценить клеточный гемостаз у женщин в программе ЭКО методом ПЦ и сравнить результаты с оптическим методом агрегации тромбоцитов.

Методы. В исследование были включены 14 женщин репродуктивного возраста с бесплодием трубно-перитонеального или мужского генеза, у которых было две и более неудачных попыток ЭКО в анамнезе. Оценку ФАТ производили перед вступлением в программу ЭКО (2–4-й день менструального цикла) и в день переноса эмбриона. Забор крови осуществляли вакуумной системой SARSTEDT («Сарштедт», Германия) с цитратом натрия 3,2% из локтевой вены, исследование проводили в течение 1 ч с момента взятия крови. Поверхностные рецепторы и внутриклеточные гранулы определяли с помощью моноклональных антител к CD61 (PE), CD42b (PE), PAC1 (FITC), CD62P (Alexa 647) и аннексину V (Alexa 647). Общее количество антигена оценивали по интенсивности флуоресценции нативных и активированных тромбоцитов смесью АДФ, активаторов тромбинового рецептора SFLLRN (PAR1) и AYPGKF (PAR4). Пробы анализировали на цитометре Gallios (Beckman Coulter, США). Количество «прокоагулянтных» тромбоцитов оценивали от общего числа клеток, несущих на своей поверхности фосфатидилсерин (аннексин V, ФС). Одновременно с методом ПЦ применяли оптический метод агрегации тромбоцитов с АДФ 1×10-5 («Технология-Стандарт») на агрегометре (CHRONO-LOG Corporation, США). Статистическую обработку результатов проводили с использованием U-критерия Манна–Уитни.

Результаты. В исследуемой группе женщин количество интегрина ß3 (CD61) и GP-1b (CD42b) на поверхности тромбоцитов в покое и после активации было выше референсных значений, полученных на популяции здоровых женщин в точках 1 и 2 (p<0,05). Уровень IIbIIIa (PAC1) на нативных клетках в первой точке был ниже референсных значений (p<0,0001), однако превысил их во второй (p<0,05). В программе ЭКО у женщин наблюдается увеличение PAC1 относительно базового уровня (p<0,007). Прокоагулянтная активность (ФС) покоящихся и активированных тромбоцитов имела тенденцию к увеличению (p<0,05). Количество и секреция тромбоцитарных гранул в исследуемой группе оставались в пределах нормы. Методом оптической агрегации изменений функциональной активности тромбоцитов у женщин в программе ЭКО обнаружено не было (p>0,05).

Выводы. Выявлены предактивация и нарастание гиперактивации тромбоцитов у женщин в программе ЭКО. Метод ПЦ обладает большей чувствительностью по сравнению с оптическим методом агрегации и поэтому является вариантом предпочтительного выбора.

Список литературы

  1. Gerotziafas GT, Dreden PV. Impact of blood hypercoagulability on in vitro fertilization outcomes: a prospective longitudinal observational study. Thromb J. 2017; 15 (9).
  2. Sun P, McMillan-Ward E, Mian R, Israels SJ. Comparison of light transmission aggregometry and multiple electrode aggregometry for the evaluation of patients with mucocutaneous bleeding. Int J Lab Hematol. 2019; 41(1): 133–140.
  3. Schisterman EF, Gaskins AJ, Whitcomb BW. Effects of low-dose aspirin in in-vitro fertilization. Curr Opin Obstet Gynecol. 2009; 21(3): 275–278.
  4. Кольцова Е.М., Балашова Е.Н., Пантелеев М.А., Баландина А.Н. Лабораторные аспекты гемостаза новорожденных. Вопросы гематологии/онкологии и иммунологии в педиатрии. 2018; 17: 98–111.
Продолжая использовать наш сайт, вы даете согласие на обработку файлов cookie, которые обеспечивают правильную работу сайта.