Введение. Одной из возможных причин привычного невынашивания беременности является слабая аллогенная стимуляция иммунной системы матери отцовскими антигенами плода. Поэтому при подготовке к беременности предлагается использовать процедуру лимфоцитоиммунотерапии (ЛИТ) [1]. Показатель, отражающий развитие специфического ответа у женщины после ЛИТ, – уровень антиотцовских антилейкоцитарных антител (АОАТ). Существуют несколько модификаций метода проточной цитометрии для определения АОАТ Ormerod [2] и Maruyama [3]. Целью данной работы был выбор метода, оптимального для мониторинга эффективности ЛИТ.
Материалы и методы. Материалом для исследования была периферическая венозная кровь супругов. Лимфоциты из крови мужчин выделяли методом центрифугирования на фиколле 1,077. Инактивированную сыворотку крови женщин получали стандартным методом. Сравниваемые методы определения АОАТ различались временем и температурой инкубации мужских лимфоцитов с женской сывороткой, а также составом раствора для отмывок и количеством отмывок после инкубации. Уровень АОАТ в сыворотке женщины соответствовал доле мужских лимфоцитов, покрытых антителами к Fc-фрагменту иммуноглобулина G. Анализ проводили на проточном цитофлуориметре FacsCalibur (Beckton Dickinson, США). При выборе метода были обследованы 170 женщин, которым при подготовке к беременности проводили 2 процедуры ЛИТ. У 82 женщин АОАТ определяли методом 1 [3], а у 88 – методом 2 [2]. АОАТ определяли до ЛИТ и через 3–4 недели после каждой процедуры ЛИТ. Достоверность различий показателей оценивали с помощью двухвыборочного t-теста.
Результаты. Показано, что после двух процедур ЛИТ АОАТ достоверно увеличиваются (р<0,001) при оценке обоими методами. Однако при использовании метода 1 уровень АОАТ был ниже, чем при оценке методом 2 (р<0,001), флуоресценция клеток была ниже, от процедуры к процедуре уровень АОАТ был нестабилен, что указывает на неоптимальные условия проведения анализа и ограничивает возможность его использования [4]. Методом 2 проведена оценка уровня АОАТ у фертильных женщин (n=20), у первобеременных с физиологическим течением гестации (n=10) и у женщин с привычным выкидышем (n=53) в период предгестационной подготовки и в I триместре беременности. Показано, что: 1) в контрольной группе первобеременных в течение I триместра АОАТ не выявляются; 2) нет различий в уровне АОАТ у женщин с привычным выкидышем до назначения лечения и в группе фертильных женщин; 3) проведение ЛИТ приводит к постепенному значимому повышению уровня АОАТ от процедуры к процедуре по сравнению с исходным. У забеременевших пациенток уровень АОАТ сохраняется высоким на протяжении I триместра [5]. Полученные результаты свидетельствуют о значимости теста АОАТ как отражающего иммуномодулирующее действие процедуры введения аллогенных клеток партнера.
Выводы. Определение уровня АОАТ с помощью проточной цитометрии методом, предложенным Ormerod (метод 2), является оптимальным способом для контроля эффективности ЛИТ при привычном выкидыше.
