Введение. Предполагается, что основной причиной возникновения идиопатического привычного выкидыша (ПВ) является нарушение формирования иммунологической толерантности матери к антигенам плода [1, 2]. Предгестационная иммуноцитотерапия считается высокоэффективным подходом к коррекции иммунологического фона у женщин с ПВ в анамнезе [3, 4]. Предгестационные аллоиммунизации способствуют формированию противовоспалительного Th2-окружения, обеспечивающего успешное развитие плода [5, 6]. Одним из факторов, способствующих формированию иммунологической толерантности в результате иммуноцитотерапии, считается молекула CD200, активно экспрессирующаяся на поверхности лимфоцитов [7]. Однако известно, что эффективная имплантация эмбриона протекает на фоне провоспалительных Th1-реакций [8]. Поэтому мы предположили, что избыточная экспрессия CD200 на вводимых при предгестационной иммуноцитотерапии аллогенных лимфоцитах может препятствовать протеканию локального воспалительного процесса и наступлению беременности. Целью настоящей работы стало выявление зависимости между экспрессией CD200 на аллогенных лимфоцитах и наступлением беременности после предгестационной иммуноцитотерапии у женщин с ПВ в анамнезе.
Материалы и методы. На основании критериев включения и исключения для участия в исследовании были отобраны 37 супружеских пар с идиопатическим ПВ в анамнезе. Предгестационные аллоиммунизации проводили в середине фолликулярной фазы двух последовательных менструальных циклов (5–9-й дни цикла). Суспензию клеток лейкоцитарной фракции периферической крови мужчины в концентрации 50×106 кл/мл вводили внутрикожно в ладонную поверхность предплечья женщины (10–12 инъекций по 0,2 мл суспензии). По завершении второй аллоиммунизации женщинам была рекомендована половая жизнь без контрацепции. Фенотипирование аллогенных (мужских) и аутологичных (женских) лимфоцитов проводили с использованием проточной цитофлуориметрии. Мультиплексное определение концентрации цитокинов в супернатантах стимулированных культур цельной периферической крови женщин проводили с помощью проточной цитофлуориметрии и технологии FlowCytomix™.
Результаты. Из 37 женщин, подвергнутых процедуре предгестационной иммуноцитотерапии, беременность наступила у 27 пациенток (73%). В 23 случаях (85,2%) доношенная беременность завершилась рождением живого ребенка. Мы установили, что наступление беременности не зависит от количества вводимых лимфоцитов, экспрессирующих молекулу CD200, однако наблюдается строгая корреляция между наступлением беременности и уровнем экспрессии CD200 на поверхности лимфоцитов. Проведенный ROC-анализ (AUC=0,755, чувствительность 62,5%, специфичность 84,6%, p=0,02) показал, что при превышении порогового уровня экспрессии CD200 на аллогенных лимфоцитах (>64,6 r.u.) вероятность ненаступления беременности увеличивается в 4,6 раза. Так, в группе пациентов с низким уровнем экспрессии CD200 не забеременели только 12% женщин, тогда как в группе с высоким уровнем CD200 не удалось забеременеть 55,6% женщин. Кроме того, мы обнаружили позитивную корреляцию между уровнем экспрессии CD200 на поверхности вводимых лимфоцитов и содержанием регуляторных Т-клеток в периферической крови женщин, определяемыми после завершения иммуноцитотерапии. Также наблюдалась негативная корреляция между уровнем экспрессии CD200 и содержанием NK-клеток в периферической крови женщин после терапии, а также содержанием митоген-индуцированных провоспалительных цитокинов в культуре цельной периферической крови женщин: IFN-γ, TNF-α и их соотношениями с IL-4 (IFN-γ/IL-4 и TNF-α/IL-4).
Заключение. Превышение порогового уровня экспрессии молекулы CD200 на поверхности вводимых аллогенных лимфоцитов приводит к снижению вероятности наступления беременности в течении как минимум 12 менструальных циклов. Повышенный уровень экспрессии CD200 вызывает супрессию провоспалительного Th1-фона, необходимого для успешной имплантации эмбриона и наступления беременности. Определение уровня экспрессии молекулы CD200 на аллогенных лимфоцитах является прогностическим критерием наступления беременности после проведения предгестационных аллоиммунизаций у женщин с идиопатическим ПВ в анамнезе.
